玫瑰ms
1. 玫瑰组织培养的方法有哪些
玫瑰组织培养的方法
2.1外植体选取从生长在田间或盆栽的优良品种植株上,选取生长健壮、无病虫害的当年生枝条的茎尖和幼茎。取材最好在晴天正午,并且取用植株上部的幼茎。阴雨天或靠近地面的幼茎,表面污染较为严重,难于消毒。玫瑰除用茎尖和幼茎做外植体外,也可以用叶片、叶柄、根、茎、原生质体、胚、花药、子房、花萼和花托做外植体[7]。
2.2消毒灭菌及无菌苗的建立取玫瑰外植体,用5%~10%的次氯酸钠浸泡10~30min或用01%~02%的HgCl浸泡5~15min。用无菌水清洗7~10次后接种。也可先用75%的酒精浸泡20~30s再采用上述方法消毒。消毒灭菌完毕后,将幼茎切割成05~10cm长的至少带有一个节的切段,接种于培养基中[6]。
2.3愈伤组织的诱导Hill(1967)最早报道从杂交茶香月季(hybridtearose)的茎上诱导了愈伤组织,该实验证明在培养基中添加2,4-D或添加NAA和激动素KT均能很快诱导出愈伤组织。随后不同实验以不同品种为试验材料,从叶、叶柄、根、茎、原生质体、合子胚、花药、子房、花瓣、花萼、和花托成功地诱导了愈伤组织。[7]
2.3.1愈伤组织的成功诱导与品种的基因型有关?摇Lloyd等(1988)曾研究Roseprsica与xanthina,hybrida,Clarissa,Rcabrosa的愈伤发生能力,发现只有Rosepersica与xanthina在MS基本培养基上,添加低浓度的BAP和NAA时,节间能产生愈伤,愈伤组织脆弱,呈淡黄绿色。Kunitake等(1993)研究了RoserugosaThunb,Rosemultiflora,Roseallbacv,SemiplenaRosehybridacv,DuplesRoseharisonii,Rosespinosissi的未成熟种子的愈伤发生能力,发现只有RoserugosaThurb能产生愈伤组织,品种Rontl和Soraya比品种Baccara和Mercedes更易产生愈伤(Kintzios等,1999)。[7]
2.3.2外植体类型?摇Aren等(1993)详细地调查了RosehybridacvMeirutral不同外植体的愈伤诱导率,发现不同外植体愈伤产生的能力不同,叶为90%,根为70%,节间为55%,花药为19%。
2.3.3激素激素也是影响愈伤生成的重要因素,Rout等(1991)以Landora为材料,在添加BA和NAA,2,4-D的MS的培养基上,外植体在接种的7~12d后,在近轴面的叶柄和中脉处产生愈伤,愈伤组织诱导频率高达92%。在接种后15~20d,外植体茎切端处产生愈伤,诱导率为76%。生长素种类和浓度对愈伤产生能力的影响同样很大。早期实验多采用NAA结合BAP或BA等,近年来多采用2,4—D,并证明2,4—D是诱导愈伤的必要因素(Kintzios等,1999;Rout等,1996;vanderSalm等,1996;Vises—suwan等,1997)。进一步研究发现2,4-D对愈伤的诱导效果依赖于月季的基因型,如2,4—D浓度从113umol/L增加到181umol/L降低了Rosehybrida栽培种“Care-freeBeauty”的愈伤诱导频率,但该浓度则对另一个品种“GrandGala”无影响。对于“RedSunblaze”而言,当浓度从113umol/L增加到452umol/L,则表现出愈伤的诱导率提高了,随后当2,4—D再增加,则显著地降低愈伤的诱导频率。愈伤组织在诱导愈伤组织的培养基上能得到很好继代培养(subculture、Li等,2002)。VanderSalm等(1996)证明2,4—D对诱导Rosepersica与xanthina和Moneyway产生愈伤是非常必要的,进一步添加低浓度的BA有正效应,但如BA浓度过高,则产生抑制作用。与以上实验结果不同,Kintzios等(1999)则发现2,4—D对愈伤诱导有负影响作用,可能因为采用的外植体是成熟的叶片。
2.3.4合子胚的发育时期对愈伤的形成能力也有影响?摇如处于心形胚的合子胚,其愈伤诱导率只有2%,子叶胚时的合子胚愈伤诱导率达到85%。[7]
2.4不定芽的诱导月季的常规繁殖方式主要靠扦插、嫁接和压条等,繁殖系数低,远远满足不了生产的需要。80年代初,采取组织培养方法快速繁殖月季苗,用侧芽、顶芽、并诱导生根。第一报道月季不定芽形成见Elliott(1970),他在聚花月季(Rosemultiflora)上成功地诱导了不定芽的形成,并诱导幼苗生根。Zieslin和Halevy(1976)报道细胞分裂素有利于提高不定芽的数量,但也诱导花器官败育或退化的频率。不定芽的诱导与供试材料的基因型有关,同时还与外植体的取材部位有关,来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快(Bressan等,1982)。培养基中添加蔗糖有增加丛芽数量的作用(Langford和wainwright,1987);加入低浓度的GA能进一步改善芽繁殖,95%的外植体能产生7个以上的不定芽(Rout等1990)。能提高芽繁殖数量的物质还有月桂酸甲酯(Voyiatzi等,1995)、乙烯(Kevers等,1992)等。诱导不定芽的培养基为MS培养基添加低浓度的激素BAP03~05mg/L,NAA0004~03mg/L或IAA或GA00~20mg/L。[7]Martin等(1981)调查了2125个玫瑰侧芽做外植体获得的无菌苗三年间在大田生长的情况,没有发现变异植株,这说明侧芽方式繁殖的玫瑰植株性状很稳定。
2.5增殖培养玫瑰的增殖培养,一靠无菌苗切段繁殖,二靠诱导不定芽,形成从生苗;三靠愈伤组织形成体细胞胚或原球胚。将已长大的月季嫩茎切成带1~2个节的茎段,投入新鲜的增殖培养基上,5~6周进行一次继代增殖,增殖系数平均达4~6。在外植到培养10~15d内第一叶的叶原基伸长,第二叶片叶原基可见;15~20d侧芽伸长;25~30d长度达6~10mm,继代增殖会按几何级数增长起来。[5]增殖培养基可用不定芽诱导培养基,如MS+BA03~05+NAA0004~03mg/L。
2.6壮苗与生根壮苗培养的培养基为:MS+BA03~05+NAA001~01或MS+BA03~05+IBA03。[4]也可以壮苗为主,增殖为辅,使增殖与壮苗合二为一。玫瑰组培苗增殖与壮苗需光照10~12h,光照强度2000lx,温度24~26℃。[4]
玫瑰在组培过程中,其生根能力因品种特性、所用植物材料及培养基成分而有较大差异,许多研究结果表明,玫瑰茎段微繁殖容易生根,使用植物激素IAA,IBA或NAA含量01~05mg/L,蔗糖含量2%~25%的MS培养基有利于玫瑰茎段生根。另外,光照、温度等对玫瑰微繁殖生根也有直接影响,Bressan等(1982)研究指出,光照时间每天12h以上,光照强度适宜则有利于生根。一般情况下,玫瑰茎段组织培养8~10d内则可生根。[6]加入适量的活性炭有利于玫瑰生根。
2.7炼苗与大田移栽炼苗和大田移植是玫瑰微繁殖获得成功的最后阶段。[6]组培幼苗由人为培养环境转移到天然生长环境中,环境条件发生巨大变化,湿度大幅度降低,温度不恒定,光照强烈,微生物多,故需炼苗过渡。一般玫瑰微繁殖炼苗需经过室内三天的取盖炼苗,然后将苗从瓶中取出,洗去根部培养基,定植在珍珠岩、泥炭、蛭石或沙土中,用3~5%的多菌灵喷洗。炼苗时要注意基质中的水分含量,水分太少,不能满足苗生长发育;水分太多,导致烂苗。炼苗中、后期要注意通气,给予足够的光照,其幼苗成活率可达80%以上。
2. MS培养基能否培养玫瑰花组织
MS能够适应大多数,但桐纳是还是要加生长素啊,尤其是看你取玫瑰花的时候部位不一样有时候也不太一样……
以及,如果这种玫瑰花的组织对一些物质有特殊依赖,比首轮庆如说活者握性炭,还需要再添加。
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5. ms.sevenrose是什么意思
七玫弯纳瑰小姐
rose 英[rəʊz] 美[roʊz]
n. 玫瑰答闹蚂; 粉红色; 蔷薇(花); 粉清埋红色的葡萄酒;
adj. 玫瑰花的; 玫瑰色的; 粉红色的; 带有玫瑰香味的
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7. 玫瑰精油 提取工艺研究:玫瑰精油提取工艺
玫瑰精油的化学成分及其抗菌活性
摘 要 通过水蒸汽同步蒸馏法提取玫瑰精油,采用GC-MS方法分析了玫瑰精油的化学组成,共鉴定出其中14个化学成分并测定其相对含量,占总含量的95.25%。香茅醇为玫瑰精油的主要成分,相对含量为90.37%。体外抑菌实验表明,玫瑰精油除对黑曲霉没有抗菌活性外,对其它7种供试菌均具有不同程度的抑制作用,其中对表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.063% (v/v),对枯草芽孢杆菌、变形杆菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)为0.125% (v/v),而对绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)的抗菌活性相对较弱, M I C为0.5%(v/v)。抑菌直径结果也表明了玫瑰精油除对黑曲霉、绿脓杆菌罩竖的抗菌活性兆闷升较弱外,对其它6种菌株的抑菌直径都大于8.5mm。考察了玫瑰精油对3种敏感菌株包括金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)、大肠杆菌(革兰氏阴性菌)和白色念珠菌(真菌)的杀菌动态过程,为玫瑰精油的应用提供了理论依据。
关键词 玫瑰精油;成分;抗菌活性
1玫瑰精油的化学组成
天然玫瑰的精油组成十分复杂,主要成分是单萜类化合物,如香叶醇、香茅醇、芳樟醇等,玫瑰醚、倍半萜烯、倍半萜含氧化合物也占相当比例,其它的化合物有庚醛、乙醇、烷烃系列( C 1 7 ~ C 2 7 ) (玫瑰油石蜡烃的主要成分)等[ 1 ]。而这些化学成分含量的多少及化学成分上的差异,造成这些玫瑰油香气的微妙差异[ 2 ]。总的说来,香茅醇、香叶醇、B- 2苯乙醇和橙花醇与它们的酯类是构成玫瑰花香的基本成分,是玫瑰的主体香气成分。
2玫瑰精油的提取和分离
玫瑰油的生产工艺主要有水蒸气蒸馏法,有机溶剂浸提法、超临界二氧化碳萃取法和分子蒸馏法等玫瑰油称为/液体黄金0,是玫瑰花的提取物。玫瑰精油在食品、化妆品、医药、保健品等领域具有重大的应用价值和经济价值,因此其提取被广泛地研究。
1玫瑰精油的化学组成
天然玫瑰的精油组成十分复杂,主要成分是单萜类化合物,如香叶醇、香茅醇、芳樟醇等,玫瑰醚、倍半萜烯、倍半萜含氧化合物也占相当比例,其它的化合物有庚醛、乙醇、烷烃系列( C 1 7 ~ C 2 7 ) (玫瑰油石蜡烃的主要成分)等[ 1 ]。而这些化学成分含量的多少及化学成分上的差异,造成这些玫瑰油香气的微妙差异[ 2 ]。总的说来,香茅醇、香叶醇、B- 2苯乙醇和橙花醇与它们的酯类是构成玫瑰花香的基本成分,是玫瑰的主体香气成分[ 1 ]。但玫瑰精油抗菌活性目前国内未见
文献报道,本研究通过玫瑰精油对8种菌株的抑菌直径、M I C、M B C的测定以及杀菌动态研究,揭示了玫瑰精油具有很好的抗菌族老活性,为玫瑰精油作为细菌感染性疾病的选择性用药,同时也为玫瑰精油的综合开发利用提供了科学依据。
1仪器和材料
1.1主要仪器
DL2CJ22N超净工作台,LDZX240BN立式自动电热压力蒸汽灭菌器, DPX-9082B-Z恒温培养箱,英国VG platformII,气质联用仪。
1.2实验材料与试剂
牛肉膏、蛋白胨、琼脂等皆为生化试剂。其它试剂均为分析纯试剂。
1.3 玫瑰的来源
玫瑰购自三圣乡花卉市场。
1.4 菌种及培养条件
表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,缩写为S.e以下同)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,S.a)和枯草芽孢杆菌
(Bacillussubtiliis,B.s),大肠杆菌(Escherichiacoli,E.c)绿脓杆菌
(Pseeudomonaseruginosa,P.a)、变形杆菌(Proteusvulgaris,P.v)、白色念珠菌
(Candidaalbicans,C.a)和黑曲霉(Aspergillusnigar,A.n)均接种于中科研 微生物研究所。前3种为革兰氏阳性菌,大肠杆菌、绿脓杆菌和变形杆菌为革兰氏阴性菌,后2种为真菌。除黑曲霉需用察氏培养基于28℃培养5d外,其余菌种均于营养琼脂培养基在37℃培养24h。
2 试验方法
2 . 1 菌悬液的制备[7]
将上述供试菌种用适宜的培养基斜面活化后,用
液体培养基制成含菌量约为1 05c f u#m L- 1菌悬液。
2 . 2 精油提取与含量测定
采用水蒸气同步蒸馏法提取精油。玫瑰花碾
碎后加水沸蒸回流3 h。所得精油用无水硫酸钠脱
水,过滤后量取体积。取适量精油用正己烷溶解稀
释为体积分数0 . 1 %用于气质联用分析。样品测
定前置于- 2 5e下密封贮存[ 8 ]。
2 . 3 G C - M S分析方法[9]
气相色谱条件:色谱柱D B - 5 ( 3 0 m@0 . 2 5 m m
@0 . 2 5Lm ) ,进样口温度2 6 0e,柱温6 0e~
2 2 0e。升温程序:起始温度6 0e,以1 5e/ m i n升
温至1 6 0e,再以5e/ m i n升温至2 5 0e,维持2
m i n。汽化室温度2 5 0e,气质接口温度2 8 0e。进
样量1LL ,分流比3 0B1 ;载气为氦气,纯度
9 919 9 % ,流速1 . 2 m L#mi n- 1。
质谱条件:离子源为E I源,电子能量7 0 e V ,离子
源温度2 3 0e,四极杆1 5 0e,扫描范围3 0 ~ 5 0 0 a m u。
经谱库检索并与保留时间相结合鉴定精油各
组分峰,并对色谱峰用面积归一化法进行定量,计
算各组分的相对含量。
2 . 4 抗菌活性实验
2 .4 . 1 琼脂扩散法
抑菌直径的测定采用琼脂扩散法[ 1 0 , 1 1 ]。用无
菌棉签蘸取1 08c f u#m L- 1的试验菌悬液,在营养
琼脂平板表面均匀涂抹3次,然后绕平板边缘涂抹
一周,盖好表面皿, 4e冰箱保存5 m i n ,滤纸片(用
打孔器将滤纸制成直径为6 . 0 m m的小圆纸片)
1 6 0e干热灭菌2 h ,平放于无菌平皿内,每片滴加
5LL的玫瑰精油,室温自然晾干,用无菌镊子取样
片轻轻贴放于平板表面,每个平板贴2片试验样片,
1片无菌生理盐水对照片。放于培养箱内培养,黑
曲霉在2 8e温度下培养5 d ,其它菌株均在3 7e培
养2 4 h。测量抑菌圈直径大小,实验重复3次。
2 .4 . 2 微量肉汤稀释法
M I C及M B C的测定采用微量肉汤稀释
法[ 1 0 , 1 1 ]。M I C ( M i n i m a l I n h i b i t o r y C o n c e n t r a t i o n )为
最小抑菌浓度,即药物与一定浓度的菌液作用后,
能够抑制可见菌生长的最低浓度, M B C ( M i n i m a l
4 8 94期李玉杰等:玫瑰精油的化学成分及其抗菌活性
参考文献
8. 魔域掉钱版999朵玫瑰跟99朵玫瑰值多少钱=多少MS
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