乙醯丁香酮配製方法
Ⅰ 如何配製AS(乙醯丁香酮),書上寫的是配成200umol/L。
配100mM,甲醇先少量溶解再無菌水定容,0.1962g配10ml,200umol/l是使用在最後培養液的濃度,用的時候每1L加2ml,然後根據你配的量換算,比如100ml培養液就加200ul
Ⅱ 加了乙醯丁香酮的培養基滅菌後還能用嗎
您好,最好是使用新的培養基。實驗結果產生偏差。
Ⅲ dmso多少溶解as
不知你的試驗細節,不好分析原因.我們是這樣做的,配製AS的時候,DMSO和水的比例是1:1溶解AS,比如你要配20mlAS,那就10mlDMSO完全溶解AS後再加10ml水混勻,4℃保存,通常AS配成1000x的母液,一升培養基加1mlAS,再倒平板.
溫度越高越能溶解滴呀.
Ⅳ 生物試劑濃度單位的換算
試劑母液濃度*工作液=100mg/mL*500mL=50000mg 母液,根據質量來算出mol,在算出濃度
Ⅳ 乙醯丁香酮的介紹
乙醯丁香酮是一種化學物質,分子式是HOC6H2(OCH3)2COCH3,。

Ⅵ 菜薹種質資源創新有哪些方面
一、傳統方法在菜薹種質創新中的應用
現有菜薹種質資源主要來源於常規途徑,常規技術中應用最多的方法是系統選育法,即根據育種目標對原始材料中的不同株系進行多次選擇、比較鑒定,篩選出優良的種質。利用這種方法,廣東省廣州市蔬菜科學研究所選育出四九心-19號,四九心-20號,其中四九心-19號產量比四九心增產1950~3900kg/ km2,葉色較深綠,主薹高度增加6~8cm,除耐熱、耐濕外,還較耐霜霉病和菌核病,是目前菜薹常規品種中種植面積最大的早熟品種之一。十月紅菜薹則是由胭脂紅中發現的優良單株經過系譜選育而得,曾是湖北省的主栽品種,且被推廣到長江流域各省。
華南農業大學植保系篩選出抗病毒病品種60天特青,然後對60天特青經單株選擇的20多個不同株系進行田間比較,選出代號為8722的中花菜心品種,後來又對8722菜心進行優質、豐產、耐病毒病的系統選育,篩選出8722選菜心新品種。
油綠50天菜心則是利用四九菜心與50天菜心雜交選育的151菜心為母本,以60天菜心為父本,雜交後經過連續8代自交選育而成(張華等,2005)。
張華等(2005)於1999年利用遲心2號與60天油青菜心雜交,經連續6代自交系選出葉薹油綠、商品性較理想的油綠701品種。
雄性不育是高等植物中普遍存在的一種現象,十字花科芸薹屬作物雜種優勢明顯,採用雄性不育系制種是此屬作物利用雜種優勢的主要途徑之一。回交轉育是獲得優良雄性不育系的最常用的方法。李大忠(2002)從福州市地方菜薹品種七葉心自交後代中發現不育株。經過一代測交,三代回交後,不育株率穩定在50%左右,獲得雄性不育兩用系66A。用66A與小白菜雜交,雜種一代的一般性狀偏向小白菜,表現出較強的生長優勢,尤其是可食用部分較父母本增長了1~2倍;品質卻偏向菜薹,略帶甜味,柔軟可口。趙利民等(2005)以大白菜CM S341127為不育胞質供體,以柳州早菜薹為受體,通過雜交、連續回交方法育成菜薹胞質雄性不育系TC12321。TC12321植株生長發育正常,不育性穩定,雌蕊功能正常,蜜腺發育健全,自然授粉結實良好,經濟性狀優良,配合力高,綜合抗病性強。許明等(2003)利用大白菜核不育系9810721 作為不育源,以紫菜薹ZB3 為目標親本,經過雜交、自交、兄妹交等轉育手段,將雄性不育基因轉育到紫菜薹中,獲得紫菜薹「甲型」兩用系、臨時保持系和雄性不育系。而且筆者採用同樣的方法,將核不育基因向菜薹品種轉育,得到了含有早-49遺傳基因的新甲型兩用系、臨時保持系和雄性不育系(許明等,2006)。王玉剛等(2005)亦通過雜交、自交等方法,將白菜雄性核不育性向菜薹可育品系03S001(翡翠油青菜心)中轉育,獲得了新的菜薹100 %核不育系及其相應的甲型兩用系和臨時保持系。
二、遠緣雜交在菜薹種質創新中的應用
菜薹和油菜的AA組染色體相同,且其種間雜交有低度育性,為將油菜雄性不育基因轉育到菜薹上提供了條件。劉勝洪等(2006)的試驗表明:雜交後代的花葯不育率為F1代<BC1代<BC3代,在BC3代群體植株中,不育率為94.60%,接近BC2代植株不育率水平,說明在不斷的回交過程中,植株的不育率越來越高並相對穩定。
晏儒來、向長萍等(2000)於1988年開始向紫菜薹轉育波里馬油菜雄性不育系,以甘藍型油菜和紫菜薹的雜種作母本,最初用大股子作轉育親本,經過4年6代的轉育選擇,於1992年秋從240個測交種中獲得不育率達100%且性狀相對穩定的材料3 份,即0-1、0-2-2、28-9 及其相應的保持系5 -1-4、5-1-3 和29-4-2。為了改良上述不育系的綜合性狀,1995年以抗病、早熟、耐熱和菜薹無苦味為主要改良目標性狀,選用了OF 系統(十月紅2號×四九菜心)的一些早熟株系和十月紅2號的一些株系為轉育親本。選用9405的F2 中19個不育株作母本雜交,在後代中堅持選不育率高的測交種,再從中選不育性徹底,生長勢較強,早、中熟,抗病性強,且無苦味的不育株。經過3年6 代的選擇,於1997年秋育成不育率達100%且綜合性狀較好的不育系9617、9630、9631 及其相應的保持系。其中9617 自播種至開始採收為40~45d,9630 為50d,9631 為55d左右。
劉自珠(1996)利用甘藍型油菜雄性不育株為不育源、菜薹為轉育父本,通過種間雜交、連續回交,選育出菜薹胞質雄性不育系002-8-20A及相應的保持系049-20B。該不育系結實正常,不育株率和不育度達到93%以上,已用於雜種一代組合的配製。
張成合等(2003)將菜薹同源三倍體與二倍體相互雜交,3x×2x的結籽率為34.78%,2x×3x的結籽率為26.17%。經染色體檢查,雜交子代植株絕大多數為非整倍體,其中三體植株佔33.3%(3x×2x)和40.70%(2x×3x)。經細胞學鑒定和核型分析,從三體植株中初步鑒定出三體3、三體7、三體8和三體9 等4 種初級三體。這些都是難得的遺傳材料。
黃邦全等(1999)通過種間雜交將Ogura 蘿卜雄性不育細胞質導入了紫菜薹,通過連續回交獲得了葉色正常、蜜腺正常的紫菜薹Ogura細胞質雄性不育系。黃邦全(2002)以Ogura細胞質雄性不育紫菜薹(AA,2n=20)為母本,以不同蘿卜品種(RR,2n=18)為父本進行雜交,獲得了大量的屬間雜種。雜種F1幼苗在低溫下子葉及真葉均不缺綠,以紅蘿卜為父本獲得的雜種F1植株葉柄、葉脈呈紫紅色;以白蘿卜為父本獲得的雜種F1植株葉柄和葉脈不呈紫紅色。所有的雜種F1植株都開白花,蜜腺正常。雄配子高度不育,但是雌配子具有部分育性。雜種F1花粉母細胞的染色體數目為預期的2n=19,染色體平均配對構型為15.53Ⅰ+1.34Ⅱ+0.25Ⅲ+0.01Ⅳ,多數染色體以單價體的形式存在,但也有一些二價體、三價體甚至四價體,最多達到6Ⅰ+3Ⅱ+1Ⅳ,參加配對的染色體數達13條,表明A染色體組和R染色體組具有一定的同源性,蘿卜染色體上的有利基因可以通過部分同源重組或者代換進入到紫菜薹中。同時,在F1中發現了2株染色體自然加倍的雙二倍體。雙二倍體與未加倍的雜種F1都表現為父本蘿卜的白花性狀,蜜腺正常,低溫下子葉不黃化。雖然雙二倍體在減數分裂過程中能形成具有19條染色體的配子,雙二倍體的花葯比未加倍的雜種F1發育要好得多,但是雙二倍體的育性還是低於未加倍的雜種F1。盡管未加倍的雜種F1在減數分裂時多數染色體以單價體的形式存在,同時也有二價體、三價體甚至四價體的形成,並且存在落後染色體和染色體橋。
黃邦全(2002)以OguraCMS紫菜薹×蘿卜雜種F1(AR,2n=19)為母本,以甘藍型油菜(AACC,2n=38)為父本進行雜交,獲得了8 株雜種植株。其中1株(PRN-1)的花色為嵌合體,該植株上的花多為黃色,但是也有乳白色花,另外還有1朵花甚至1個花瓣上同時具有黃色和白色區域,其餘3株(PRN-2、PRN-3、PRN-4)都開白花。PRN-4的花葯開花前退化,其餘3株都可以看到3~6枚花葯,能夠產生部分花粉,但是PRN-2的花粉不能被I2-KI溶液染色。PRN-2具有4個蜜腺,PRN-1和PRN-3具有2個蜜腺,PRN-4無可見蜜腺。在低溫下,PRN-2葉色正常,其餘3株幼葉表現不同程度缺綠。PRN-1的染色體數目為2n=38,PNR-2的染色體數目為2n=35,PRN-3的染色體數目為33,PRN-4的染色體數目未能確定。它們的染色體平均配對構型各不相同。與甘藍型油菜回交後,PRN-1、PRN-2、PRN-3 植株各自產生了一定數量的種子,而PRN-4則未產生種子。
梁紅等(1994)用雜種胚離體培養的方法獲得了菜薹與甘藍的正反交F1代。雜種一代的一般性狀介於兩親本之間,偏向父本,並表現出強烈的生長優勢。其蛋白質含量普遍超親,游離氨基酸含量和還原糖含量介於兩親本之間,或超過高親親本。
鄭岩松等(2003)研究了芥藍以及芥藍×菜薹種間雜種後代對蕪菁花葉病毒(TuMV)油菜株系的抗性。結果表明,芥藍對廣東省廣州地區TuMV油菜株系具有近於免疫的抗性。芥藍×菜薹種間雜種回交後代抗TuMV油菜株系的選擇效應受回交親本影響很大:用抗病品種與雜種回交的後代,經兩次系統選擇後,已獲得16個經濟性狀較好的抗病品系;但用感病品種與雜種回交兩代之後,抗病性明顯下降。
三、物理化學誘變在菜薹種質創新中的應用
誘變育種是利用理化因素誘發植物發生變異,通過選擇育成新品種的方法。
尚愛芹等(1999)利用不同濃度的秋水仙素對二倍體菜薹種子和幼苗生長點進行不同時間長度的浸泡,結果表明,用0.1%秋水仙素水溶液處理幼苗生長點48h的誘變效果最好,誘變率可達26.67%,浸泡種子效果不佳,最高誘變率僅為4.0%。四倍體植株結籽率較二倍體明顯降低,平均達42.3%,而八倍體植株幾乎是完全不育的。隨著染色體組的增加,花粉粒大小和葉片保衛細胞中的葉綠體數均顯著增加,與二倍體(CK)比較,四倍體植株生長旺盛,花薹的產量和品質均有所提高。
廖飛雄等(2001)利用60Co-γ射線輻射菜薹種子,發現對預先浸泡1h的菜薹種子來說,適宜的處理劑量為200~300Gy。廖飛雄等(2003)對60Co-γ射線輻射後的菜薹器官進行離體培養時,發現對菜薹種子的適宜輻射劑量是200Gy左右,經過催芽的種子適宜劑量為50~100Gy,離體培養莖尖可用40~70Gy。
四、生物技術在菜薹種質創新中的應用
(一)體細胞變異體離體篩選
組織培養得到的再生植株以一定頻率發生變異是一種普遍的現象,這便是利用植物體細胞變異體離體選擇法對作物現有品種進行有限的修飾與改良的基礎。通過這種方法,已成功地篩選出耐鹽水稻、抗稻瘟病細胞突變體、抗除草劑大豆等一系列有價值的突變體,在作物遺傳改良方面發揮了重要作用。在植物耐熱性篩選研究中與傳統的耐熱性選擇方法相比,離體篩選方法具有不受季節和氣候條件限制、變異范圍廣、選擇群體大、節省土地和人力等特點,可顯著提高種質資源創新的效率。
何曉明等(1999)進行了菜薹耐熱性離體篩選的研究,結果表明,耐熱性不同的菜薹品種對離體培養中的熱脅迫反應亦有所差異,35℃培養30d的無菌苗存活率可以作為菜薹耐熱離體篩選的選擇指標。通過熱脅迫交替選擇,從熱敏菜薹品種中,初步篩選出3個耐熱無性系A -2、B -1、B -8。這些無性系耐熱品系在熱脅迫中的莖尖存活率基本保持在60%~80%,而未經篩選的無性系莖尖的存活率平均僅為20. 83%,因此經過篩選的無性系的耐熱性有了明顯改善。同時還發現,經9 代培養和4次熱脅迫篩選,這3個無性系的耐熱性均表現比較穩定,表明這種耐熱性可以在無性繁殖過程中傳遞下去。通過熱脅迫選出的無性系其莖尖繁殖系數也較原群體有所提高。
廖飛雄等(2003)在離體篩選耐羥脯氨酸變異的研究中,發現對菜薹莖尖和愈傷組織來說,經0.3mg/ml的羥脯氨酸3~4個周期篩選後,可獲穩定抗性株系。菜薹種子萌發後的幼苗在1.0mg/ml濃度上,經4個世代連續篩選可獲抗性株系。3mg/ml濃度可用於幼苗的前期淘汰。入選系耐羥脯氨酸的能力和耐熱性提高。廖飛雄等(2004)利用「六十天特青,離體篩選出的一個菜薹耐羥脯氨酸選擇系Hypr01,發現在人工氣候箱模擬栽培高溫逆境下,Hypr01和未經選擇的六十天特青相比,有較強的耐熱性。
(二)基因工程
徐秉芳等(1996)研究報道紫菜薹的花粉經低溫水合、熱激、滲激三步程序,分離出大量具萌發能力的脫外壁花粉,脫外壁率可高達60%以上。在含有碳源與氮源及Roberts 培養基鹽成分的鹼性PEG培養基中,首次使芸薹屬脫外壁花粉萌發,萌發率可達41%。這使得利用花粉作為外源基因的媒介進行植物遺傳的轉化有了重要的突破。
施華中(1995)以花粉特異啟動子Zm13-260 控制的Gus 基因作為報告基因,用電激法分別轉化紫菜薹花粉原生質體和花粉粒,通過瞬間表達檢測,比較了二者的轉化效果。結果表明,花粉原生質體的電激導入效果比花粉粒高,前者的Gus 基因瞬間表達水平遠遠高於後者,Gus 基因活性是後者的10倍。並探討了Gus 基因在不同發育時期花粉原生質體中的時序表達特性,花粉愈幼嫩,Zm13 的啟動活性愈低。
張國裕等(2006)以建立的菜薹高頻再生體系為基礎,利用GUS染色組織分析法研究了根癌農桿菌菌株、乙醯丁香酮(A S)、預培養時間、浸染時間和共培養時間等因素對菜薹(B rassica camp estris L. var. pchinesis)子葉遺傳轉化的影響,探討了適宜菜薹轉化的卡那黴素與抑菌抗生素使用濃度。結果表明,農桿菌菌株A GL0 對菜薹的浸染能力最強,添加乙醯丁香酮有利於菜薹轉化;子葉外植體預培養2d 後浸染(菌液濃度OD 600值為0.8)15min,共培養2d,然後轉移到含15mg/L 卡那黴素和100mg/L T icarcillin 的篩選培養基上,進行轉化植株的再生,植株再生率及外植體GUS 陽性率均較高,是較優的轉化條件;該試驗共獲得8 株轉化植株,轉化率達2.44%,經PCR分析和Southern 雜交檢測表明,Gus基因已整合進入菜薹基因組。
張揚勇等(2003)通過對農桿菌介導法將韌皮部特異表達啟動子RSs-1(Rice sucrose synthase-1,水稻蔗糖合成酶)與雪花蓮凝集素(Galanthus nivalid agglutinin,GNA)基因構成的嵌合基因轉化菜薹,獲得轉基因植株。該試驗目的是利用雪花蓮凝集素對刺吸式昆蟲有較好的抗蟲效果,採用延遲篩選抗生芽的方式,最終得到了抗生植株,並通過了分子檢測。
通過基因工程的手段進行菜薹種質的創新還剛剛起步,隨著菜薹轉基因體系的逐步完善以及克隆的有用基因越來越多,該技術在菜薹種質改良中的應用將越來越廣泛。
Ⅶ 化學AS是什麼意思
Ac是醋酸
一
AS
分子式:HOC6H2(OCH3)2COCH3,
分子量:196.20
乙醯丁香酮(AS)的作用原理,是其可誘導膿桿菌Vir基因的活化,從而促進外源基因的整合。所以最好讓其有一定的誘導時間再轉化,效果要好些的,而不是加完後直接轉化(活化需要)。
乙醯丁香酮的配製方法:1,用於擬藍芥花侵染的,配製使用的溶劑為DMSO,母液為100mM,使用濃度請參照相關文獻。2,另外一種是用於愈傷組織的侵染,是用少量甲醇溶解後,再用蒸餾水定容。之後過濾除菌
。顯然兩者溶劑不一樣,不過建議還是使用DMSO。
二,
砷
Ⅷ 關於培養基中加入乙醯丁香酮的問題
不知你的試驗細節,不好分析原因。我們是這樣做的,配製AS的時候,DMSO和水的比例是回1:1溶解AS,比如你要配答20mlAS,那就10mlDMSO完全溶解AS後再加10ml水混勻,4℃保存,通常AS配成1000x的母液,一升培養基加1mlAS,再倒平板。
溫度越高越能溶解滴呀。
Ⅸ 植物組培需要哪些培養基培養基的適用范圍 主要做花木的! 譬如桂花樹
植物組培可能都不一樣,最好是說清楚是哪個植物.我是做水稻的.用的有
誘導培養培養基(NBD)\x05NB①+2,4-D 2 mg/L+ Gelrite 2.8 g/L,pH 5.8
繼代培養培養基(NBD)\x05同誘導培養培養基
共培養培養基I(NBCI) NB+2,4-D 2 mg/L + 乙醯丁香酮(As)100 μmol/L,pH5.5
共培養培養基Ⅱ(NBCⅡ)NBCI+Gelrite 2.8 g/L,pH5.5
選擇培養基I(NBSI)NBD+頭孢黴素500 mg/L+潮黴素B 50 mg/L,pH 5.8
選擇培養基Ⅱ(NBSⅡ)NBD+頭孢黴素400 mg/L+潮黴素B 50 mg/L,pH 5.8
分化培養基(RM)\x05NB+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.5 mg /L+KT4.0 mg/L+頭孢黴素300 mg/L+潮黴素B 50 mg/L+Gelrite 3.5 g/L,pH 5.8
生根培養基(ShM)\x051/2 NB無機鹽+蔗糖15 g/L+ Agar7 g/L,pH 5.8
其中① NB:N6大量+ MS鐵鹽+ B5微量+B5有機+水解酪蛋白0.5 g/L+谷氨醯胺0.5 g/L+脯氨酸0.5 g/L+蔗糖30 g/L
Ⅹ 乙醯丁香酮 配製方法
我所知如下:
1,用於擬藍芥花侵染的,配製使用的溶劑為DMSO(二甲基亞碸),母液為100mM,使用濃版度請參照相關文獻。權
2,另外一種是用於愈傷組織的侵染,我網上看到的DOC文件說是用少量甲醇溶解後,再用蒸餾水定容。之後過濾除菌
。
顯然兩者溶劑不一樣,不過建議還是使用DMSO。
另外,乙醯丁香酮(AS)的作用原理,是其可誘導膿桿菌Vir基因的活化,從而促進外源基因的整合。所以最好讓其有一定的誘導時間再轉化,效果要好些的,而不是加完後直接轉化(活化需要)。
