花卉噴毒鑒定

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二維碼中間有毒字，就不用看其他了，假的

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5. 花卉噴金色nike標掉了怎麼辦

這個耐克標掉了，看看用線重新縫回去吧，或者就是加一些膠水粘一下吧，也只能這樣做了呀。
畢竟耐克標掉了確實不好看呀

6. 花卉脫毒苗的鑒定包括哪些方面

採用莖尖培養法所獲得的莖尖苗並非全部植株都脫除了病毒。由於植物的品種不同，所取莖尖的大小以及病毒種類不同，有些植株脫毒了，有些仍然帶有病毒，因此還需要對莖尖苗作帶毒狀況測定，去除那些帶毒株。

病毒鑒定的依據是症狀的有無、症狀特徵、抗血清反應、PCR或分子雜交、電鏡檢查、生物學測定結果等。全年測定3次：試管苗時期、生長中期和開花期。

花卉植物脫毒苗的鑒定，除檢測是否帶病毒外，還包含了對花卉植物開花性狀的測定，即所謂開花鑒定。開花性狀，如花形、花色、花瓣數等，通過組織培養有可能產生變異，有時植株雖然除去了病毒，但也有可能使花卉質量下降，成為「劣等的脫毒苗」。這也不是莖尖培養的目的。經過鑒定，淘汰那些帶毒苗和劣等苗，保留健康優質的脫毒苗作為原始種，進行莖段培養（毋需再用莖尖培養）或同時採用扦插繁殖，擴大種源，從而獲得大量優質種苗。

7. 花卉病毒類似病害的診斷和鑒定方法有哪些

植原體、螺原體等無壁菌門的原核生物造成的植物病害與植物病毒產生的症狀相似，無病症表現，因此，它們又叫病毒類似病害。花卉上比較常見的是植原體病害，因此我們介紹一下植原體病害的診斷和鑒定。

1 超薄切片，電鏡下觀察植原體

方法如植物病毒的超薄切片和電鏡觀察。

2 抗生素治療診斷

用四環素、土黴素和金黴素等對受病植株進行葉面噴施和灌根，植原體對這幾種抗生素敏感，病害症狀可以得到緩解。而植物病毒對抗生素不敏感，如果施用，對病害無效。

3 植原體PCR檢測

根據植原體的共同保守序列，用植原體16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2進行植原體直接PCR擴增，可擴增到植原體的特異擴增帶。

還可以將直接PCR產物分別稀釋40倍後，引物換為R16R2/R16F2進行巢式PCR擴增，可得到與引物設計相符的植原體的特異擴增帶，說明為植原體病害。

這里以仙人掌植原體叢枝病的PCR檢測為例，介紹植原體的PCR檢測技術。

實驗操作如下：

Ⅰ.總核酸提取

（1）取0.3g植株幼嫩組織，用液氮冷凍後充分研磨成粉狀。

（2）移入含有0.6ml預熱到60℃的CTAB DNA提取緩沖液中，在60℃水浴中溫浴30min。

（3）加入等體積酚∶氯仿∶異戊醇（25∶24∶1），抽提30min。

（4）12000r/min離心8min，取上清液，重復（3）、（4）步直至蛋白質除盡。

（5）加入氯仿∶異戊醇（24∶1），抽提30min，12000r/min離心8min，取上清液。

（6）加入等體積預冷的異丙醇及1/10體積的醋酸鈉（3mol/L，pH5.2），混勻，-20℃保持至少30min，14000r/min離心10min，使核酸沉澱。

（7）用70%乙醇洗滌2次後，.真空乾燥。

（8）沉澱溶解於100μl TE緩沖液中。

（9）取10μl DNA經0.7%瓊脂糖凝膠電泳後觀察結果，計算DNA濃度。其餘於-20℃冰箱中保存備用。

Ⅱ.PCR擴增

參照Lee所報道的植原體16S rRNA基因通用引物對R16mF2/R16mRl序列和R16F2/R16R2序列合成引物，引物序列如下：

R16mF2：5′-CATGCAAGTCGAACGGA-3′

R16mRl：5′-CTTAACCCCAATCATCGAC-3′

R16F2：5′-ACGACTGCTGCTAAGACTGG-3′

R16R2：5′-TGACGGGCGGTGTGTACAAACCCCG-3′

引物溶解於適量滅菌水中至終濃度為10μmol/L。

直接PCR（Direct-PCR）：

（1）取一PCR薄壁管，依次加入下列試劑

10×PCR反應緩沖液 5μl

5mmol/L MgCl2 4μl

2.5mmol/L dNTP 4μl

R16mF2（或R16F2） 3μl

R16mRl（或R16R2） 3μl

4U/μl 1TaqDNA聚合酶 1μl

模板 2μl

加入雙蒸水至終體積為50μl，混勻並加入30μl石蠟油。

（2）PCR擴增。反應循環為95℃預變性5min；95℃變性30s，55℃退火1min，72℃延伸90s，35個循環後於72℃保溫10min，4℃冰箱中保存。

（3）取5μl PCR產物於1%瓊脂糖凝膠檢測PCR擴增結果。

巢式PCR（Nested-PCR）：

將用引物對R16mF2/R16mRl擴增的直接PCR產物按1∶40比例稀釋後，作為反應模板，引物對換為R16F2/R16R2，退火溫度升高至60℃，其餘反應條件同直接PCR。

Ⅲ.結果

用植原體16S rRNA基因通用引物R16mRl/R16mF2進行植原體直接PCR擴增，可擴增到一條約1.5kb的特異擴增帶（圖1）。通過實驗，用泡桐叢枝作為植原體的陽性對照，檢測出YNOl樣品（仙人掌品種珊瑚枝叢枝）和YNO2（仙人掌品種堆羅漢叢枝）為植原體病害。其他YNO3（仙人掌品種豬耳掌叢枝）、YNO4（仙人掌品種金獅子叢枝病）、YNO5（仙人掌品種青海波叢枝）不是植原體病害，可能為品種的特性。

圖1 直接PCR擴增結果

8. 花卉類病毒的診斷和鑒定方法有哪些

類病毒因為不具有外殼蛋白，所以不能用血清學、電鏡等方法來診斷和檢測。類病毒常用的檢測方法有生物學檢測、雙向電泳、RT-PCR和分子雜交等方法。

1 生物學檢測

利用類病毒的特異鑒別寄主來診斷和檢測。如菊花矮化類病毒（CSVd），可以從待檢樣品中抽提低分子RNA，接種到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品種、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接種緩沖液的組成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接種時用沾有接種原的剎須刀在菊花和爪哇三七的莖部輕輕切割5～10刀，再用棉棒塗抹。番茄可以用4～5葉期的幼苗直接用塗抹法接種。被接種植物放在30℃左右的溫室培育，觀察症狀。接種36d後，菊花上出現黃色斑點，頂葉較少，從上數第3～5葉上症狀更明顯。接種45d後，爪哇三七出現頂葉捲曲症狀。但沒有柑橘裂皮病類病毒接種時症狀明顯。接種60d後，番茄上不表現任何症狀。但回接菊花的Mistletm品種，證明CSVd在番茄上屬於潛伏侵染。

生物檢測需要嚴格的溫度條件，如果溫度條件控制不嚴格便難以得到可信的結果。此外，檢測批量樣品，還需要較大的空間。

22 雙向電泳檢測

2.1 核酸的抽提

抽提緩沖液的組成為0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，簡稱為TESLP。1g鮮菊花葉片加2～5倍體積的TESLP緩沖液磨碎，加入等體積的水飽和酚∶氯仿（1∶1）處理，離心分離後用乙醇沉澱回收全核酸。之後用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等體積的4mol的LiCl，離心回收2mol LiCl的可溶組分，用乙醇沉澱濃縮後溶於適當體積的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向電泳

按照Singh等的方法進行。首先在室溫下用1倍TBE電泳緩沖液分離核酸，直到染料XC-FF達近底部的7.5%為止。然後換成加熱到沸騰的0.125倍TBE電泳緩沖液，顛倒正負極並用表面加熱器保持電泳板的溫度在80℃以上，直到染料XC-FF到達膠的上端。電泳完後用銀染色觀察核酸的有無（圖1）。

圖1 正反向電泳法檢測菊花矮化類病毒RNA示意圖

與生物接種相比，正反向電泳凝膠電泳檢測菊花矮化類病毒，可以從相當於2.8mg鮮重的菊花樣品中檢測到菊花矮化類病毒CSVd，並同時可檢測10～20個樣品材料。總之，制備用於正反向電泳的粗核酸的方法簡便，需要的鮮葉量少，可以作為該類病毒的常規檢測方法。正反向電泳凝膠電泳與雙向凝膠電泳比較，省去了第一項電泳完後割膠回收的試驗步驟，操作更為簡便。

9. 毒APP鑒定功能怎麼樣

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